受託CRISPR gRNA library調製

CRISPR転写活性化SAMライブラリー

SAMシステムはゲノムワイドで強力な転写活性を誘発し、遺伝子の活性化による機能獲得スクリーニングを行うために有用です。

SAMは、ゲノムの各コーディング領域の転写機能を強力かつ特異的に活性化します。SAMライブラリーを使用することにより、機能獲得したヒト遺伝子をスクリーニングすることができます。CRISPR/Cas9 Synergistic Activation Mediator（SAM）は、内在性遺伝子の転写機能を強力に活性化するように設計されたタンパク質複合体です。SAMは、gRNAによりゲノム上の特定のローカスを得意的にターゲティングすることができます。SAM複合体にはVP64、P65、HSF1各因子の３つの転写活性化ドメインが含まれており、転写開始位置から上流200bp以内のどの位置でもターゲットとし、3因子の作用により転写を増強します。SAMシステムでは切断活性を無くしたCas9が使用されており、内在性ゲノムのDNA鎖が切断されないことを確認しています。

ヒトのゲノムワイドSAMライブラリーは、RefSeqデータベース（23,430種のアイソフォーム）にある既知のコーディングアイソフォームすべてを活性化することができるため、遺伝子の活性化による機能獲得スクリーニングに有用です。このライブラリーは、ヒトおよびマウスの初代培養細胞、幹細胞、癌細胞、安定型発現細胞におけるスクリーニングに使用されています。SAMライブラリーを使用することにより、様々な条件下で細胞の生存に必須となる遺伝子や、癌細胞において薬剤耐性能を生じる遺伝子などを同定することが可能です。

SAMライブラリーのデザインや構築に関する詳細は、以下の論文をご覧下さい。Konermann S*, Brigham MD*, Trevino AE, Joung J, Abudayyeh OO, Barcena C, Hsu PD, Habib N, Gootenberg JS, Nishimasu H, Nureki O & Zhang F. Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature, doi:10.1038/nature14136.

SAMライブラリー内容物

• 70,290 gRNA sequences;ヒトゲノム中のユニークコーディングアイソフォーム23,430種それぞれに対する、各3個のターゲティングsgRNA
• ヒトSAM gRNAライブラリーはpLenti sgRNA(MS2)_zeoベクター骨格にクローニングされています。
• ライブラリーは2種類のプラスミド、pLenti dCas-VP64_BlastおよびpLenti MS2-P-HSF1_Hygro、と共に提供されます。

SAMライブラリー製品

すべてのSAMライブラリーはIndustrialグレードで、在庫品です（通常納期：5～7日間）。発注量を増やすことはできますが、納期が長くなる可能性があります。ライブラリー製品についてのお問い合わせは弊社までご連絡下さい。

機能獲得スクリーニングにおけるSAMライブラリーの使用法

SAMライブラリーは、ゲノムの転写開始点に隣接する上流域をターゲットとする各種CRISPR gRNAをプールしたものです。SAMによる機能獲得遺伝子のスクリーニングには、ヒトのゲノムワイドSAM sgRNAライブラリーの他に、2種類（dCas9-VP64およびMS2-P-HSF1）のSAM複合体を組み合わせて使用する必要があります。 Read More »

パスウェイに関するCRISPR gRNAライブラリー

パスウェイCRISPR gRNAライブラリーのプールは、パスウェイに関する重要な遺伝子のターゲットスクリーニングに最適です。Drug Gene Interactionデータベースからターゲット遺伝子を同定しデザインされたライブラリーで、パスウェイや疾患に関連する遺伝子すべてを対象にスクリーニングすることができます。すべてのgRNAシークエンスはBroad Instituteによりデザインされ検証済で、pLentiCRISPR v2ベクター内にクローニングされています。ライブラリーはIndustrialグレードで、レンチウイルスによるパッケージングが可能な状態で提供しています。このライブラリーがカバーするgRNAシークエンスの詳細はライブラリーハイパーリンクをご覧下さい。

パスウェイに関するライブラリーはIndustrialグレードで、カタログ製品です。

カタログ品のライブラリーの他に、以下のパスウェイ関連ライブラリーを調製することができます（納期3～4週間）。すべての遺伝子リストはリンクをご覧下さい。

*プールライブラリーは最少容量25 μgで、100 μgまで調製可能です。

CRISPR gRNAライブラリー製品仕様

• ライブラリーは25 µgずつ分注されています。gRNAシークエンスはpLentiCRISPR v2ベクター内にクローニングされており、品質はIndustrialグレードです。
• ライブラリー製品にはテクニカルガイド、MSDS、COA（分析証明書）が添付されます。