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GenCircle dsDNA合成サービス

細菌由来の配列や薬剤耐性マーカーを含まない400bp超のバックボーン
安全で効率的なノックインテンプレートなどとして利用可能

目的の遺伝子を導入するために通常使用されるプラスミドベクターのバックボーンは一般的に1.5 kb以上で、薬剤耐性遺伝子が含まれています。 耐性遺伝子があることによって、細菌のスクリーニングや培養は容易になりますが、一方、遺伝子・細胞治療の分野では、耐性遺伝子の残留物が体内に持ち込まれるリスクがあり、薬剤耐性による安全上の問題が生じる可能性があります。

ベクターバックボーンを小さくすることは、発現をより安定させ、トランスフェクション効率を高くすることができ、その結果、RNA 転写とタンパク質発現のレベルが向上します。

GenScript では、薬剤耐性マーカーのない小さな環状二本鎖DNA合成サービスとして、GenCircle dsDNA を開発しました。

ベクターのバックボーンは薬剤耐性遺伝子、細菌由来の配列を含まない、わずか400bp超のサイズで、宿主株の外では複製されません。

GenScriptの20年以上におよぶ高い遺伝子合成技術を用いることで、お客様は任意の目的の遺伝子を含む GenCircle dsDNA を合成することができ、遺伝子および細胞療法研究の安全性と効率を向上させることができます。

アプリケーション

細胞治療

トランスポゾン/トランスポザーゼ ベクター CRISPR ノックイン テンプレート

遺伝子治療

AAV/レンチウイルスパッケージングプラスミド、非ウイルスベクター mRNA調製テンプレート

DNAワクチン

抗原発現ベクター

細胞株/モデル動物の構築

トランスポゾン/トランスポザーゼ ベクター CRISPR ノックイン テンプレート

サービスの特長

サービスの特長

安全!薬剤耐性マーカーなし

耐性遺伝子が挿入されておらず、宿主外での増幅がない

簡単!免疫原性/毒性が低い

CpG アイランドなどの細菌由来の配列が除去され、発現がより安定

小さい! わずか400 bp超のバックボーン

同等量のプラスミドと比較して、より高い遺伝子発現 より高いトランスフェクション効率を実現

効率的! KI/ウイルスパッケージング/GOI 発現効率の向上

ノックイン効率 最大30 %向上 ウイルス力価 最大3倍向上 転写レベル 最大 4 倍、タンパク質発現レベル最大20 % 増加

サービス詳細

サービス名 グレード GOI 長さ 収量 提供形状 納期 # アプリケーション
GenCircle
dsDNA
産業用グレード 1-50 kb * 100 μg - g 凍結粉末もしくは溶液
(バッファーはオプション)
2週間~
  • トランスポゾン/トランスポザーゼベクター
  • ウイルスパッケージングプラスミド
  • GOIの転写と発現
プレクリニカルグレード
  • CRISPR KIテンプレート
  • 前臨床段階の研究


1) GenScriptで遺伝子合成をし、その後GenCircle dsDNAを合成する

2) お客様よりGOIを含むプラスミドを提供いただき、そこからdsDNAを合成する

#その他のGOIの長さ、および収量をご希望の場合には直接お問い合わせください

QC 品質管理

QC項目 管理基準 産業用グレード プレクリニカルグレード
サンガーシークエンス シークエンスが100 %正確である
制限酵素処理 消化後に電気泳動を行い、パターンが正確であることを確認
分光光度計 収量の確認
NanodropによるUV値の測定 A260/280 = 1.8-2.0
電気泳動 RNAやゲノムDNAが電気泳動後に確認されない
均質性 90%以上がスーパーコイルであること
TALエンドトキシン定量 < 0.01 EU/μg
≤ 0.005 EU/μg
バイオバーデンテスト アガープレートで48時間経過後なにも生育しない
pH 8.0±0.5 (TE buffer)
残留E. coli DNA(定量PCR) ≤ 2%
残留タンパク質 (HCP ELISA) ≤ 1%

ケーススタディ

結果:従来のプラスミドを用いた方法と比較して遺伝子ノックイン効率が 最大30%向上

  • CRISPRノックイン(2.5 kbの挿入)
  • トランスポゾン遺伝子ノックイン (4.8 kb フラグメント)

品質分析

GenCircle dsDNAサービスは、さまざまな長さのターゲット遺伝子を対象として、これまでに世界で数々の注文をお受けしています。

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