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Protein Refolding Services

タンパク質リフォールディングサービス

大腸菌のタンパク質レベルが上がるに従って蓄積した目的タンパク質の不溶性凝集体は、封入体(IB)と呼ばれます。IB形成の具体的なメカニズムはまだ完全に理解できていませんが、タンパク質の種類と発現条件により異なる可能性があります。それは大腸菌細胞の翻訳が急速なペースで働き、正確な三次元構造のタンパク質がリフォールディングできないため、IBになったと考えられます。これらの不溶性凝集体は生理活性を持たず、研究者にとって障害となっていました。生体外リフォールディングの過程において、標的タンパク質の生物学的活性の再生は極めて困難であり、タンパク質を扱う生化学者が直面する最も重要な課題のひとつです。GenScriptはタンパク質リフォールディングサービスを提供し、この課題を解決します。

弊社の高静水圧技術、低分子添加剤、カラムリフォールディングなど、弊社独自のリフォールディング技術によって、お客様の課題解決に貢献いたします。


特徴

タンパク質リフォールディングサービスはお客様の要求に応じて、バクテリアタンパク質発現サービスにより提供しております。95%以上の封入体は可溶化し、リフォールディングすることができます。弊社は純度85%以上のリフォールディングタンパク質を提供できます。 最終収量は凝集体を形成した目的タンパク質の総量により異なります。リフォールディングタンパク質はカスタマイズバッファーにて納品いたします。弊社タンパク質サービスの主要要素は以下の手順を含みます:

  • 目的タンパク質の生物化学および生物物理学特性の評価
  • 1Lシステムでのリフォールディング最適化
  • 詳しいリフォールディング戦略はタンパク質の配列および構造特性に基づいて決められます。弊社の標準プロトコルは以下の通りです:
    • 直接希釈
    • 透析および膜分離
    • 低分子添加剤:
      • 変性剤
      • アミノ酸
      • ポリマー:ミセル及びリポソーム
      • アルコール
      • 還元/酸化試薬
      • 塩:Na/K/Mg-Cl及び(NH4)2SO4
      • 糖類:グルコース、スクロース、トレハロース
  • 人工シャペロン:界面活性剤含有および不含
  • カラム法:ゲルろ過クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、アフィニティーカラムおよびイオン交換 クロマトグラフィー
  • シャペロンを介した方法:ATP依存および非依存
  • 勾配方法:pH, Tem, 静水圧, 変性剤

研究例

1.A 封入体からタンパク質の変性と再生:


Fig. A-1 (左図): 封入体の調製と変性
Lane 1: 超音波処理後の総タンパク質
Lane 2: 遠心分離後の上清
Lane 3: 1M尿素による洗浄
Lane 4: 8M尿素による溶解
Fig. A-2 (右図): リフォールディングタンパク質
Lane 1: リフォールディングしたタグを含まないAタンパク質
 
 
 

2. B 封入体からの融合タンパク質の変性と再生:

Fig. B-1 (左図):封入体の調製と変性
Lane 1:遠心分離後の上清
Lane 2:遠心分離後の沈殿
Lane 3:尿素による溶解
Lane 4:通貨画分(フロースルー)
Lane 5:尿素を含むイミダゾールによる洗浄
Lane 6:含尿素的咪唑によ洗脱
Fig. B-2 (右図):リフォールディング したタンパク質
Lane 1および2:リフォールディングしたB融合タンパク質
 
 
 
 
 

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お客様からのご推薦

GenScript provides fast, professional protein synthesis services at very reasonable prices. By making it cost-effective to outsource protein production, GenScript has made it possible for my lab to focus on our own area of expertise and get more research done. The detailed planning, updates, and reports that GenScript provides all of the quality control that one could ask for. I strongly recommend GenScript's protein production service.

— Dr. Barry Bradford, Kansas State University, USA

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納品物

GenScriptは凝集体の標的タンパク質をもとに、1Lの発現システムから最低純度85%以上の可溶性リフォールディングタンパク質を提供しております。リフォールディングタンパク質は、カスタマイズバッファーにて納品します。特性分析はタグまたはお客様指定の特異抗体(お客様よりご提供いただきます)を用いたCBB染色ゲルおよびウエスタンブロットにより同定されます。

お見積もりとご注文

  • 見積依頼書を提出いただいた後、弊社担当者から24時間以内にお客様にご連絡いたします。
  • ご注文の際は、電話、メールまたはファックスをご利用ください。
Email: japanmarket@genscript.com
TEL: 03-6803-0843
FAX: 03-3836-0371, 03-4496-5000(受注専用)