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BacuVance™バキュロウイルス発現系

バキュロウイルス発現系(Baculovirus Expression Vector System、BEVS)は、組換えタンパク質の大量作製にキャリアとして強力な高汎用性のシステムです。高品質バキュロウイルスDNAは外来目的DNAを適合な昆虫宿主細胞に導入し、組換えタンパク質をトランスフェクションし発現させます。 昆虫細胞はE. coliより溶解性が改善し、トランスフェクション後修飾能力がもつ、分泌タンパク質の収量を大幅に向上する利点があります。

GenScriptは社内開発科学者チームにより、感染バキュロウイルス昆虫細胞からウイルス作製および組換えタンパク質発現、様々なスケールの発現を適したBacuVance™バキュロウイルス/昆虫細胞発現プラットフォームを開発しました。アメリカに遺伝子合成最大のサプライヤーであり、GenScriptは目的タンパク質より発現高めるSf9、Sf21、Hi-5および他の昆虫細胞系に特異的なコドン最適化を無料で提供しようします。弊社独自のプロジェクトに特異的なプロトコルやスケールをもとめる、お客様にはGenScriptのBacuVance™パッケージをお観めします。

特長:

  • 独自技術:BacuVance™バキュロウイルス/昆虫細胞発現技術なら、最適の生産プロトコルを提供します。

  • バキュロウイルス高級作製:GenScriptの組換えバキュロウイルス作製サービスは、品質一貫性保証のbatch-to-batchウイルスを提供します。

  • タンパク質の大量作製:プロジェクトにつき、最大100Lまで

  • 一貫化サービス:GenScriptは遺伝子合成から、組換えタンパク質発現、安定細胞株作製抗体作製および分析開発など下流活動までのサービスを幅広く提供可能です。

InsectPower™パッケージ

マイルストーン 仕様 納品 納期1
1、サブクローニング
  • 発現ベクター1種以上のサブクローニング
コンストラクトレポート 2週間
2、ウイルスの作製
  • 組換えバクミドDNAの作製
  • 組換えバクミドDNAを用い、昆虫細胞へトランスフェクション
  • p1ストック(低力価)、p2ストック(高力価)の作製、定量-PCRによりウイルス力価の測定
  • anti-His/GSTまたは他の抗体を用いたウエスタンブロットにより、作製したP1とP2のタンパク質発現量を確認
2-3週間
3、パイロット発現および精製評価
  • p2ストックにより昆虫細胞に感染
  • 親和性精製
  • SDS-PAGEおよびウエスタンブロット
発現データ 1.5週間
4、1L発現および精製
  • 1L昆虫細胞での発現タンパク
  • ワンステップ精製
  • SDS-PAGEのQC検証 ウエスタンブロット2およびMALDI-TOF3
精製タンパク質QCデータ 1-2週間

1上図はGenScriptの一般運送時間を示します。追加要求は追加手順と時間がかかりますので、ご了承ください。

2ウエスタンQC無料データはanti-Hisまたはanti-GST抗体によって検出したタグタンパク質について利用可能です。他のタグタンパク質については、追加料金が必要するかもしれません。

3MALDI-TOF、N-末端配列およびLC-MSのようなQCデータは、追加料金が必要です。

BacuVance™スタンダードパッケージ

プロトコルをすでに確立した場合、GenScriptはバキュロウイルスタンパク質発現スタンダードパッケージを提供いただきます。以下の手順はすべてお客様の要求に応じて実行されます。

マイルストーン 仕様 納品 納期1
1、サブクローニング
  • 1種発現ベクターのサブクローニング
コンストラクトレポート 2週間
2、組換えウイルスの作製
  • 組換えバクミドDNAの作製
  • 組換えバクミドDNAを用い、昆虫細胞へトランスフェクション
  • p1ストック(低力価)、p2ストック(高力価)の作製、定量-PCRによりウイルス力価の測定
  • anti-His/GSTまたは他の抗体を用いたウエスタンブロットにより、作製したP1とP2のタンパク質発現量を確認
5ml、>107pfu/mlのウイルスストック 2-3週間
3、タンパク質発現評価
  • p2ストックにより昆虫細胞に感染
  • 親和性精製
  • SDS-PAGEおよびウエスタンブロット
発現データ 1.5週間
4、昆虫細胞発現および精製
  • 1L昆虫細胞での発現タンパク
  • ワンステップ精製
  • SDS-PAGEのQC検証 ウエスタンブロット2およびMALDI-TOF3
精製タンパク質QCデータ 1-2週間

1上図はGenScriptの一般運送時間を示します。追加要求は追加手順と時間がかかりますので、ご了承ください。

2ウエスタンQC無料データはanti-Hisまたはanti-GST抗体によって検出したタグタンパク質について利用可能です。他のタグタンパク質については、追加料金が必要するかもしれません。

3MALDI-TOFデータは、追加料金が必要です。

バキュロウイルス準備サービス

GenScriptの組換えバキュロウイルス作製サービスは、品質一貫性保証のbatch-to-batchウイルスを提供いたします。弊社は、力価を測定した強感染力で、すぐに使うできるウイルスストック、および詳細なストレージプロトコルを提供いたします。

マイルストーン 仕様 納品 納期
1、サブクローニング
  • 種発現ベクターのサブクローニング
コンストラクトレポート 2週間
2、ウイルスの作製
  • 組換えバクミドDNAの作製
  • 組換えバクミドDNAを用い、昆虫細胞のトランスフェクション
  • 作製したp1ストック(低力価)、p2ストック(高力価)の力価測定
  • タンパク質発現の検証
ウイルスストック 2-3週間

研究例

1. Project evaluation and high secretory expression level (6 mg/L)

Customer's initial request was to synthesize the gene in question and to clone it into our BV vector for intracellular expression. The expected yield was 0.1–1 mg of tagged protein with over 70% purity. Based on a thorough sequence analysis, we designed a new strategy, which was approved by the customer, to use the protein's native signal peptide to drive secretion. In the end, we obtained 3 mg of protein with a purity level over 80% from 0.5 L SF9 CM. The protein's identity was further confirmed by MALDI-TOF.

Baculovirus Expression System
Fig. SDS-PAGE Analysis of target protein purified by SP column
Lane 1–8: Eluted fractions with 1 M NaCl in 20 mM PB, pH 5.0
2. Tag-free protein purification

After protein expression, the conditioned medium was dialyzed against buffer, and loaded onto SP column. The predicted size of the target protein was 78KDa. The SDS-PAGE results showed that proteins of the same size as the target had been obtained in lanes 12, 13, 14.

Baculovirus Protein Purification
Fig. SDS-PAGE Analysis of target protein purified by SP column
Lane 1: The condition medium
Lane 2–14: Eluted fractions with gradient concentration of NaCl from 0 to 500 mM in 20 mM PB, pH 5.0

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  • お見積りをご依頼する際には、見積もり/オーダーフォームをダウンロードし、必要事項をご記入のうえ、電子メール又はファックスでご送信ください。
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